Иммунофенотипирование лимфоцитов крови

Код: 201

Срок исполнения 2 рабочих дня

Описание

Подготовка

Интерпретация результатов

Где пройти

Показания к назначению анализа:

инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением, рецидивирующие инфекции;
иммунодефицит, генетически обусловленный или приобретенный;
аутоиммунные болезни;
аллергические заболевания;
онкологические заболевания;
обследование реципиентов до и после трансплантации органов;
обследование пациентов перед серьезными оперативными вмешательствами или осложненное течение послеоперационного периода;
контроль лечения цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами.

Иммунофенотипирование клеток – это определение поверхностных маркёров и, соответственно, принадлежности клеток к той или иной субпопуляции. Иммунофенотипирование - метод, основанный на реакции антител с антигенами и используемый для определения специфических типов клеток в образцах крови, костного мозга, лимфатических узлов или других тканей. К антителам, которые реагируют со специфическими антигенами клеток, присоединена особая флюоресцентная метка. Эту метку можно обнаружить с помощью специальных приборов – проточных цитометров или люминесцентных микроскопов. Иммунофенотипирование с использованием метода проточной цитометрии имеет преимущества перед использованием других методов за счет большей точности, скорости, возможности одновременной регистрации нескольких антигенов на одной клетке. В настоящее время иммунофенотипирование клеток крови и костного мозга является "золотым стандартом" в диагностике иммунодефицитов, лимфопролиферативных, аутоиммунных и инфекционных заболеваний.

Как известно, лейкоциты экспрессируют особые у каждой субпопуляции поверхностные молекулы, которые могут служить маркерами (метками). Разработана систематизированная номенклатура маркерных молекул; в ней группы моноклональных антител, каждая их которых специфически связывается с определенной маркерной молекулой, обозначены символом CD (Claster Designation). Поскольку набор антигенов клеточной поверхности лимфоцитов зависит не только от типа и стадии дифференцировки, но и от их функционального состояния, с помощью моноклональных антител можно не только различать разные субпопуляции клеток, но и отличать покоящиеся клетки от активированных.

Популяционный состав лимфоцитов периферической крови:

Т-клетки (CD3+) составляют большую часть лимфоцитов периферической крови (70-80%). Предшественники Т-лимфоцитов образуются в костном мозге, а затем мигрируют в вилочковую железу (тимус), где происходит их окончательное созревание. Благодаря наличию на мембране уникального Т-клеточного рецептора (TCR), Т-лимфоциты способны распознавать чужеродные антигены, встроенные в молекулы главного комплекса гистосовместимости (MHC-I, MHC-II) антиген-презентирующих клеток (макрофагов, дендритных клеток и др). Т-лимфоциты участвуют в реакциях клеточного иммунитета: противовирусном иммунном ответе, аллергических реакциях замедленного типа, реакции отторжения трансплантата, обеспечивают противоопухолевый иммунитет. За исключением минорных субпопуляций, Т-клетки делятся на две основные группы: лимфоциты CD4+ - Т-хелперы и лимфоциты CD8+ - цитотоксические Т-лимфоциты.

Забор осуществляется утром натощак, после 8 – 12 часового ночного периода голодания. Если у пациента нет возможности прийти в лабораторию утром, кровь следует сдавать после 6 часов голодания, исключив в утреннем приеме пищи жиры. Желательно за 1 – 2 дня до обследования исключить из рациона жирное, жареное и алкоголь. Допускается пить чистую негазированную воду. Помните! сок, чай, кофе, тем более с сахаром - тоже еда!!!

Исключить прием лекарств (за 48 часов до исследования по предварительному соглашению с врачом стероидных и тиреоидных гормонов).

Исключить физическую нагрузку и эмоциональное перенапряжение за 24 часа до забора.

Исключить употребление табака (за 1-3 часа).

При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендовано проводить повторные исследования в одинаковых условиях, в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и т.д. Время (период) забора определяет врач. Не соблюдение времени забора может повлиять на достоверность результатов.

НЕПОСРЕДСТВЕННО ПЕРЕД ЗАБОРОМ:

Успокоиться
Посидеть (не менее 5 минут)
Проинформировать медицинскую сестру о наличии у пациента судорог, возбуждения, гемофилии (нарушения свертываемости, если известно)

ПОСЛЕ ЗАБОРА КРОВИ:

Держать руку в согнутом положении не менее 15 минут!

ПОМНИТЕ! Несоблюдение этих простых правил существенно повлияет на качество результата анализа и повлечет за собой нежелательные последствия, такие как синяки и гематомы в месте проведения манипуляций.

ВАЖНО! За соблюдение правил подготовки к процедуре забора крови ответственность возложена на пациента!

Общее число Т-лимфоцитов может быть снижено при следующих состояниях:

ВИЧ-инфекция;
нарушения иммунной системы при хронических инфекциях;
воздействие ионизирующей радиации в запороговых дозах;
воздействие химических веществ с лимфотоксическим действием;
неспецифические воспалительные процессы;
старение;
лечение цитостатиками, кортикостероидами;
отравление тяжелыми металлами, пестицидами, в т.ч. диоксином;
болезни метаболизма (диабет, синдром Иценко-Кушинга, дисфункция паращитовидных желез);
голодание или дефицит в диете жизненно-важных компонентов;
депрессия;
ожоговая болезнь;
сразу после тяжелой физической нагрузки (у профессиональных спортсменов);
СХУ (синдром хронической усталости).

Число Т-лимфоцитов может увеличиваться при:

лимфолейкозах (острых и хронических);
синдроме Сезари;
болезни Венегера;
тимоме.

Т-хелперы (СD3+ CD4+) - cубпопуляция лимфоцитов, несущая на своей мембране молекулу CD4 и способная узнавать комбинацию из антигена и молекул MHC класса II на поверхности макрофага и связываться с ней. CD4+ T-клетки продуцируют разнообразные растворимые факторы - цитокины. Биологические эффекты, опосредованные цитокинами многообразны: активация макрофагов, стимуляция пролиферации цитотоксических Т-лимфоцитов, стимуляция пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов, регуляция синтеза антител. По способности вырабатывать разные цитокины и участвовать в регуляции клеточного и гуморального иммунитета Т-хелперы подразделяются на Т-хелперы первого и второго типа (Тh1 и Th2). Тh1 вырабатывают преимущественно интерферон гамма и интерлейкин-2, а Th2 секретируют интерлейкин-4, интерлейкин-5, интерлейкин-6.

Число Т-хелперов может быть снижено при таких заболеваниях или состояниях как:

ВИЧ-инфекция;
вирусные инфекции (корь, гепатиты, цитомегаловирусная инфекция, краснуха, инфекции, вызванные вирусом Эпштейн-Барр);
бактериальные инфекции (стафилококковая инфекция, туберкулез, лепра, кокцидиомикоз, аспергиллез и др.);
воздействие химических веществ с лимфотоксическим действием;
воздействие ионизирующей радиации;
старение;
лечение цитостатиками, кортикостероидами;
отравления тяжелыми металлами, пестицидами, в т.ч. диоксином;
болезни метаболизма (диабет, синдром Иценко-Кушинга, дисфункция паращитовидных желез);
голодание или дефицит в диете жизненно-важных компонентов;
парапротеинемии;
ожоговая болезнь;
сразу после тяжелой физической нагрузки (у спортсменов);
СХУ (синдром хронической усталости).

Число Т-хелперов может увеличиваться при следующих заболеваниях:

острый Т- лимфобластный лейкоз;
хронический Т-лейкоз;
синдром Сезари (Т-лейкоз взрослых);
системная красная волчанка, ревматоидный артрит;
тимома;
гиперактивность иммунитета.

Клетки-регуляторы, обладающие супрессорной активностью (CD4+). Эти клетки играют ключевую роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний, в развитии толерантности к трансплантационным антигенам (предотвращать отторжение трансплантата), а также регулируют иммунный ответ на экзоантигены, такие как аллергены.

Цитотоксические Т-лимфоциты (CD3+ CD8+) осуществляют в организме функции антигенспецифической цитотоксичности. T-клеточный рецептор этих лимфоцитов распознает свой антиген в комплексе с молекулами МНС-I на мембране клеток собственного организма, которые принято называть клетками-мишенями. Цитотоксические Т-лимфоциты несут функции уничтожения собственных клеток, зараженных вирусами опухолевых клеток и др.

Число Т-цитотоксических лимфоцитов снижается при следующих заболеваниях:

первичные (врожденные) иммунодефициты (ТКИД, синдром Ди-Джорджи, синдром «голых лимфоцитов», Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром, синдром Вискотта-Олдрича);
вторичные (приобретенные) иммунодефициты (хронизация EBV-инфекции, хронизация цитомегаловирусной инфекции, герпес-вирусная инфекция (6-го и 7-го типов), облучение, отравление диоксинами).

Число цитотоксических Т-лимфоцитов может увеличиваться в следующих случаях:

начальная стадия СПИДа;
острая вирусная инфекция;
корь;
парапротеинемия;
малярия;
аутоиммунные заболевания;
множественная миелома;
хронический вирусный гепатит;
сепсис;
гемофилия;
шистосомоз;
солидная плазмоцитома;
инфекционный мононуклеоз;
абсцесс легкого, почки;
перитонит.

Индекс CD4+/CD8+ (соотношение Т-хелперов к цитотоксическим Т-лимфоцитам) в норме составляет в среднем 1,5 - 2,0. На разных этапах нормально текущего воспалительного процесса количество Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в крови меняется, но так, что их соотношение не становится ниже 1. При тяжелом течении воспалительного процесса соотношение Тх/ЦТЛ может упасть ниже единицы. Подобное падение вызывается преимущественным образованием, дифференцировкой, особенностями циркуляции в кровотоке, уходом к воспалительному очагу или в лимфоузлы Т-лимфоцитов той или иной субпопуляции. Наиболее часто оно наблюдается при тяжелых воспалительных септических процессах и тяжелых формах инфекционных заболеваний. Особенно часто и сильно это проявляется при воспалительных процессах на фоне многих врожденных некомпенсированных иммунодефицитов, некоторых аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, ревматоидный артрит).

Отдельно стоит вопрос о соотношении Тх/ЦТЛ при синдроме приобретенного иммунодефицита (СПИДе). При данном заболевании вирус иммунодефицита человека избирательно поражает и разрушает Т-хелперы, в результате чего соотношение Тх/ЦТЛ понижается до значений гораздо меньших 1.

В-лимфоциты (CD19+) являются основным клеточным субстратом гуморального иммунного ответа, состоящего в выработке антител, способных связать и нейтрализовать бактерии, которые проникли в организм. Основной характеристикой В-лимфоцитов является наличие на их поверхности рецепторов для распознавания антигенов бактериальной стенки. После взаимодействия рецептора с антигеном В-лимфоциты дифференцируются в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины, связывающие именно эти антигены.

Число В-лимфоцитов снижается при следующих состояниях:

врожденная гипогаммаглобулинемия или агаммаглобулинемия;
воздействие ионизирующей радиации;
после удаления селезенки;
лечение цитостатиками, иммунодепрессантами;
отравление тяжелыми металлами, пестицидами;
острая вирусная инфекция;
хроническая бактериальная инфекция.

Число В-лимфоцитов может увеличиваться при таких состояниях как:

острые и хронические бактериальные, грибковые и паразитарные инфекции;
хронические заболевания печени, цирроз;
аутоиммунные заболевания (СКВ, ревматоидный артрит);
хронический лимфолейкоз;
миеломная болезнь;
макроглобулинемия Вальденстрема;
туберкулез;
моноклональная гаммапатия.

NK-клетки (СD3- CD16+ CD56+) Нормальные киллеры (NK, normal killers, или natural killers) были описаны впервые как большие гранулярные лимфоциты (БГЛ), способные in vitro убивать некоторые опухолевые клетки, а также инфицированные вирусами клетки. NK осуществляют антигенспецифическую эффекторную иммунную реакцию антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦТ). Функция NK-клеток сходна с таковой Т-цитотоксических лимфоцитов, однако в отличие от ЦТЛ ТЛ-клетки не способны самостоятельно распознать клетку-мишень, если с ней не связались антитела.

Причины снижения числа NK-клеток:

первичные ИД: агаммаглобулинемия без В-лимфоцитов (сцепленная с полом), гипер-IgM-синдром;
облучение;
лечение кортикостероидами;
состояния после удаления селезенки;
лечение цитостатиками;
СПИД;
паразитарные заболевания;
системные заболевания;
дефицит цинка.

Число NK-клеток может увеличиваться при: